Informações

Disciplina: Bioprocessos Cultivo Celular [cultivo: Animal] - 2025/1
Professor(a): Marianna Boia Ferreira
Atividade: Protocolo prática 2
Deadline: 2025-03-28T00:00:00.000-03:00
Integrantes: Matheus de Lara Szajda,Heitor Torres Zacharow,Javerson Goulart Filho,Guilherme Baran Sinhori
Código de envio blackboard: e5a023b6a06c442ca032a4acdfe1ec19

Protocolo

Para a realização desta prática foram necessários os seguintes materiais e reagentes:

• Tubo Falcon de 13,5 mL;
• Eppendorfs de 2 mL;
• Micropipetas;
• Placa de Petri com cultivo celular com células B16-F10;
• Centrífuga;
• Estufa de cultivo;
• Meio DMEM;
• Soro fetal bovino;
• Etanol 70%.

A placa com células B16-F10 levada ao fluxo laminar para realizar a raspagem das células aderidas. Ela foi homogeneizada com álcool 70% e duas alíquotas de 10 µL foram adicionadas na câmara de Neubauer, sendo pipetada uma em cada lado da câmara. Em análise no microscópio, constatou-se uma concentração elevada de células no quadrante superior esquerdo, motivo pelo qual foi preparada outra placa, porém com uma diluição de 10 vezes. Foi realizada a diluição na proporção de 1:10, sendo pipetado 10 µL da solução de células com 90 µL do soro em um tubo eppendorf de 2 mL. O meio diluído foi então submetido contagem, que resultou em 30 células. Multiplicando pelo fator de diluição e pelo fator de 10^4 foi verificado que a concentração de células no meio preparado era de 3x10^6 cel/mL. O conteúdo da placa foi então transferido para um tubo Falcon de 13,5 mL e centrifugado por 5 minutos na velocidade 6. O sobrenadante foi descartado e no mesmo tubo foram adicionados 1,5 mL de meio DMEM e 1,2 mL de soro fetal bovino. Com a micropipeta, a solução foi homogeneizada e transferida para 3 eppendorfs de 2 mL, cada um recebendo 900 µL da solução e 100 µL do crioprotetor DMSO. Nestas condições, cada eppendorf ficou com um volume de 1 mL e uma concentração celular de 1x10^6 cel/mL, com 50% de meio, 40% de soro e 10% DMSO. Os três eppendorfs preparados foram imediatamente colocados sob refrigeração com nitrogênio líquido.