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Recapitulação

Importância (da produção) de Proteínas recombinantes

Graças a elas, temos por exemplo, tratamentos para doenças como diabetes mellitus I.
A tecnologia do DNA Recombinante abre portas para a expressão de proteínas em hospedeiros bacterianos por meio da clonagem e expressão de genes exógenos provenientes de outras espécies, utilizando plasmídeos como vetores de expressão.

Importante

Vetor de expressão

  1. Origem da replicação compatível com o organismo modelo;
  2. Uso de um marcador de seleção para selecionar células que contenham o plasmídeo que codifica a proteína de interesse, permite a diferenciação de células que possuem o DNA plasmidial das que não possuem;
  3. Clivagem do DNA plasmidial para inserção do gene de interesse através de sítios múltiplos de clonagem;
  4. Intensificar a amplificação e transcrição do gene através do estímulo das regiões promotoras.

Usos

As Proteínas recombinantes podem ter função:

Exemplos de uso

Terapêutico

Em 1970, o desenvolvimento da vacina da Hepatite B dava-se através da purificação de antígenos virais do sangue de doadores contaminados.
Em 1980, passou-se a utilizar a

Em 2006 surge a primeira vacina recombinante contra HPV aprovada para uso em meninas com idades entre 11 e 12.

tratamento de hepatites B e C.

Eritropoetina para estimular a produção de glóbulos vermelhos.

A Insulina é o primeiro hormônio produzido geneticamente para uso comercial.
Anteriormente, este hormônio era extraído e purificado através de pâncreas de animas, como vacas e porcos, tendo um maior risco de causar reações adversas pela presença de contaminantes e impurezas no extrato.

Diagnóstico e pesquisa

No ELISA, uma proteína recombinante pode ser imobilizada em uma superfície sólida, como uma placa de microtitulação, para capturar o analito de interesse presente na amostra.

As Proteínas recombinantes são usadas como padrões de peso molecular conhecido. Isso permite que sejam criadas bandas de referência no gel de eletroforese, ajudando a determinar o tamanho aproximado das proteínas de interesse na amostra. Além disso, as Proteínas recombinantes também podem ser usadas como controles positivos, ajudando a confirmar a especificidade da detecção do anticorpo utilizado na técnica.

Podem ser usadas para bloquear a ligação de anticorpos não específicos, aumentando a sensibilidade e a especificidade da técnica. Além disso, Proteínas recombinantes podem ser utilizadas para criar padrões de intensidade de coloração, auxiliando na interpretação dos resultados, ou até mesmo na produção do próprio anticorpo.

Proteínas purificadas podem ser utilizadas em testes in-vitro, a fim de verificar sua função e sua interação com outras proteínas e moléculas, ou para produção de anticorpos através da sensibilização de animas por uma proteína recombinante.